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高效毛细管电泳色谱仪分析的在线样品富集技术晋城
幸福机械网 2022-07-14 16:45:52
高效毛细管电泳色谱仪分析的在线样品富集技术
高效毛细管电泳色谱仪(CE)是以毛细管为分离通道,以高压直流电场为驱动力,利用荷电粒子之间的淌度差异和分配系数差异进行分离,是分析科学继高效液相色谱仪之后的又一重大进展,使分析科学从微升级进入到了纳升级水平,不仅使单细胞乃至单分子分析成为可能,也使蛋白质和核酸等生物大分子分析有了新的转机。由于CE溶质区带的超小体积特性导致光程太短,圆柱形毛细管作为光学表面不够理想,对检测器灵敏度要求相当高,可通过在线样品富集技术提高检测器灵敏度。常用在线样品富集技术有色谱富集和场放大样品堆积。一、色谱富集:对于浓度小的样品溶液,引入到毛细管柱后,由于固定相本身的吸附作用,样品会吸附在固定相上而实现富集。如果用洗脱能力较弱的缓冲液配制样品,进样后样品将保留在毛细管柱上,然后用洗脱能力强的流动相洗脱,则样品会被压缩为一条很窄的样品区带,柱效会大大提高。二、场放大样品堆积:对于带电荷的样品,将样品溶解在低电导的溶液中,使样品溶液在高电导缓冲液中运行。以电动进样方式进样后,样品区带电阻大,电场强度比较高,样品离子会迅速移动穿越低电导区,在到达低电导区和高电导区交接处时,迁移速度迅速降低,形成一条窄的样品区带,而实现富集目的。利用色谱富集和场放大样品堆积对样品进行在线富集,虽然重现性有所降低,但检测灵敏度提高约20~100倍。
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